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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋 |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
Everglades病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
Everglades病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
Everglades病毒RT-PCR試劑盒
使用方法：
一、樣品 RNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL Everglades病毒PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
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成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
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5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
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Everglades病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
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N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
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超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
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Everglades病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
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MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
42℃ |
30 min |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)（35 個循環(huán)） |
95℃ |
30 sec |
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58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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后延伸 |
72℃ |
7 min |