產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 5×1ml
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：1035
  • 產(chǎn)品庫(kù)存：100
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)本產(chǎn)品包含超快速高保真 Pfu DNA 聚合酶，擴(kuò)增速度大約是普通Pfu DNA聚合酶的10-20 倍，是 Taq DNA 聚合酶的 2-6 倍，不僅縮短了延伸時(shí)間，而且提高了酶的擴(kuò)增性能，使其能夠在更短的時(shí)間里擴(kuò)增更長(zhǎng)的模板。含有 dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2×。具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可限度地減少人為誤差。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品包含超快速高保真 Pfu DNA 聚合酶，擴(kuò)增速度大約是普通Pfu DNA聚合酶的10-20 倍，是 Taq DNA 聚合酶的 2-6 倍，不僅縮短了延伸時(shí)間，而且提高了酶的擴(kuò)增性能，使其能夠在更短的時(shí)間里擴(kuò)增更長(zhǎng)的模板。含有 dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2×。具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可限度地減少人為誤差。

它具有下列特點(diǎn)：
1. 擴(kuò)增速度快，5-10s/kb，保真性高；
2. 多次凍融或長(zhǎng)期放于 4℃不會(huì)影響活性；
3. 應(yīng)用簡(jiǎn)便，減少誤差，降低了對(duì) PCR 條件的要求；
4. 含染料的 MasterMix 產(chǎn)品在 PCR 結(jié)束后可以直接上樣電泳。

成分規(guī)格

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

2×Fast HiFi PCR MasterMix(含染料)

1ml/5×1ml

2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)

1ml/5×1ml

-20℃可長(zhǎng)期保存12個(gè)月

本產(chǎn)品僅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規(guī)PCR體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR體系 
推薦反應(yīng)體系(25μl)

試劑

用量

模板ＤＮＡ

＜1ug

Primer1(10μM)

0.5μl

Primer2(10μM)

0.5μl

2×Taq Plus PCR MasterMix

12.5μl

ddH2O

Up to 25μl

（注 意：引物濃度請(qǐng)以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）

2. PCR程序

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

2min

25－35cycles

變性

94℃

10sec

退火

55-65℃

10sec

延伸

72℃

1kb/10sec

延伸

72℃

2min


注 意：    
Ａ：擴(kuò)增> 5 kb 的產(chǎn)物時(shí)，建議使用 95℃ 5 min 預(yù)變性處理。
B-1：退火溫度：zui適 Tm 與引物間的平均溫度相近，若引物間 Tm 值偏差較大，zui適Tm用引物的zui低 Tm+1-2℃）。
B-2：退火時(shí)間：對(duì)于含兼并引物、復(fù)雜模板的擴(kuò)增，建議退火時(shí)間延長(zhǎng)至30s。c：適合的延伸溫度：68-75℃；推薦的延伸速度：10-15 s/kb；質(zhì)粒等簡(jiǎn)單模板：5-10 s/kb；常規(guī)基因組模板：10-15 s/kb；復(fù)雜模板、臟模板：15-25 s/kb；略微增加延伸時(shí)間（5-10 s/kb）有利于提高低濃度、復(fù)雜模板 PCR 的產(chǎn)量，但總延伸時(shí)間不超過(guò)30s/kb）。
3. 結(jié)果檢測(cè)
反應(yīng)結(jié)束后取5μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液（含染料的不用加），然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
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