產(chǎn)品及特點(diǎn)：
人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus; HIV)，即艾滋病(AIDS，獲得性免疫缺陷綜合征)病毒，是造人類免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒。它是一種感染人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞的慢病毒(Lentivirus)，屬逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。其中人類免疫缺陷病毒 I 型(感染)在一類致癌物清單中、人類免疫缺陷病毒 2 型(感染)在 2B 類致癌物清單中。本產(chǎn)品用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測(cè)人免疫缺陷病毒 II型。
1. 一站式，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。
2. 根據(jù)人免疫缺陷病毒II型的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
規(guī)格及成分：
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編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋) |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對(duì)照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?br> 自備試劑：
樣品 RNA。
人免疫缺陷病毒II型RT-PCR試劑盒
使用方法：一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 人免疫缺陷病毒II型 PCR陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對(duì)照。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是RT-PCR 陽性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
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編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋) |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
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過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
42℃ |
30 min |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對(duì)照無擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。